艱難梭菌|4分(fēn)鍾生成嚴格培養環境，City不City？

 

艱難梭菌（Clostridium difficile，CD）是一種産(chǎn)毒素的專性厭氧革蘭陽性芽孢菌，廣泛分(fēn)布于人和動物(wù)的腸道及環境中(zhōng)。因其對氧極為(wèi)敏感，在傳統培養基上分(fēn)離培養較困難，故命名(míng)為(wèi)艱難梭菌。

在過去的十年裏，艱難梭菌感染的頻率和嚴重程度在世界範圍内不斷增加，成為(wèi)引起抗生素相關性腹瀉和院内感染的主要病原菌之一。2013年和2019年美國(guó)CDC《抗生素耐藥威脅報告》将艱難拟梭菌列為(wèi)緊急威脅的耐藥菌。

艱難梭菌感染的危險因素：

 ·抗生素使用(yòng)(2-3月使用(yòng)以上)

 ·住院(2-3個月長(cháng)期住院)

 ·高齡(＞65歲)

 ·鼻飼管和胃腸道治療

 ·胃酸抑制藥物(wù)-質(zhì)子泵抑制劑和組胺2(H2)受體(tǐ)拮抗劑

 ·免疫抑制狀态

 ·炎症性腸病

 ·胃腸道手術

 

近年來，我國(guó)部分(fēn)地區(qū)已檢測出高毒力株，表明艱難梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)已對我國(guó)臨床構成了威脅。同時，研究表明我國(guó)的CDI分(fēn)子流行病學(xué)特征具(jù)有(yǒu)自身特點，使得CDI的防控形勢十分(fēn)嚴峻。因此，臨床快速、準确診斷CDI，對改善患者預後及節省我國(guó)醫(yī)療支出具(jù)有(yǒu)重要意義。

 

2017年我國(guó)發布了《中(zhōng)國(guó)成人艱難梭菌感染診斷和治療專家共識》，将艱難梭菌感染診斷标準更新(xīn)為(wèi)：患者出現中(zhōng)至重度腹瀉或腸梗阻，并滿足以下任一條件：（1）糞便檢測CD毒素或産(chǎn)毒型CD結果陽性；（2）内鏡下或組織病理(lǐ)檢查顯示僞膜性腸炎。

 

目前，艱難梭菌的檢測方法可(kě)分(fēn)為(wèi)實驗室檢測和臨床診斷策略。實驗室檢測主要為(wèi)菌株檢測、毒素的核酸檢測和毒性檢測。

菌株檢測中(zhōng)，厭氧培養法費用(yòng)較低、操作(zuò)簡單，但仍需生物(wù)化學(xué)反應鑒定且無法判定是否為(wèi)産(chǎn)毒株，因此後續可(kě)通過PCR法或MALDI-TOF MS兩種技(jì )術對典型的艱難梭菌菌落進行鑒定。

 

2019年發布的《MALDI - TOF MS在臨床微生物(wù)鑒定中(zhōng)的标準化操作(zuò)專家共識》為(wèi)臨床微生物(wù)的高效鑒定提供了規範性指導。目前，國(guó)内已有(yǒu)實驗室使用(yòng)MALDI-TOF MS技(jì )術對經培養法獲得的艱難梭菌疑似菌株進行準确鑒定，提升了臨床實驗室鑒定艱難梭菌的水平及效率。

雖然目前艱難梭菌的檢測方法有(yǒu)多(duō)種，但糞便培養仍然是艱難梭菌檢測的金标準。在得到純培養的菌株後，後續還對培養後的菌株進行毒素分(fēn)型、分(fēn)子分(fēn)型，并檢測其耐藥性，方便臨床根據耐藥性結果給患者對症下藥，減少抗生素濫用(yòng)風險。除此之外，還能(néng)夠研究其傳播能(néng)力（如芽孢形成、黏附能(néng)力等）與傳播進化機制，預防疾病的傳播。

《艱難梭菌感染診斷（T/CPMA 008-2020）》

 

在艱難梭菌糞便培養培養時，需要先使用(yòng)無水乙醇對糞便進行前處理(lǐ)，然後使用(yòng)特殊的培養基CCFA或CDMN，嚴格厭氧培養48-72h。

 

傳統培養方法：采用(yòng)厭氧産(chǎn)氣袋培養。但由于産(chǎn)氣袋生成厭氧環境時間較長(cháng)（40分(fēn)鍾以上），細菌暴露在有(yǒu)氧環境中(zhōng)的時間較長(cháng)，導緻艱難梭菌檢出率偏低。

最新(xīn)培養方案：如今用(yòng)戶可(kě)選擇采用(yòng)智能(néng)厭氧微生物(wù)培養系統，實現更加嚴格的厭氧培養環境。例如，浙江省疾病預防控制中(zhōng)心，配合采用(yòng)了DW-100A-K智能(néng)厭氧微生物(wù)培養系統，厭氧環境的生成時間大幅縮短，避免樣本長(cháng)時間暴露在有(yǒu)氧環境中(zhōng)，且生成氣體(tǐ)環境嚴格，大大提高了艱難梭菌檢出率。

DW-100A-K系列 智能(néng)厭氧微生物(wù)培養系統

 

儀器服務(wù)于各類厭氧菌微需氧菌和嗜二氧化碳菌的培養、檢驗，可(kě)根據需要選擇特定氧氣濃度（0%-15%可(kě)選）和CO₂濃度（5%-15%可(kě)選）。儀器能(néng)快速生成環境，微需氧最快約2 min，厭氧最快約4 min，儀器穩定可(kě)靠，确保重現性100%。

 

設備自帶五級自檢質(zhì)控（氣體(tǐ)輸入氣壓檢測、罐體(tǐ)連接性檢測、罐體(tǐ)洩漏性檢測、罐體(tǐ)密封性檢測、催化劑活性檢測），确保培養罐氣密性，嚴格保障厭氧環境。

 

産(chǎn)品優勢：

1. 一機多(duō)用(yòng)：厭氧、微需氧和嗜CO₂培養；

2. 快速生成環境：微需氧、CO₂最快2 min，厭氧最快4 min；

3. 脫機培養：培養罐可(kě)從儀器上卸載、獨立控制，設置不同培養環境，培養過程完全密封，避免樣本洩漏；

4. 罐體(tǐ)靈活配置：多(duō)種罐體(tǐ)可(kě)選，滿足不同培養需求；

5. QA質(zhì)控軟件：培養前5級質(zhì)控檢測，确保重現性100%。